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關(guān)于激光誘導(dǎo)熒光產(chǎn)生的原理
時間:2017-08-16 00:20:48 點(diǎn)擊次數(shù):358

由熒光的發(fā)光原理可知,分子熒光光譜與激發(fā)光源的波長無關(guān),只與熒光物質(zhì)本身的能級結(jié)構(gòu)有關(guān),所以,可以根據(jù)熒光譜線對熒光物質(zhì)進(jìn)行定性分析鑒別。照射光越強(qiáng),被激發(fā)到激發(fā)態(tài)的分子數(shù)越多,因而產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度越強(qiáng),測量時靈敏度越高。一般由激光誘導(dǎo)熒光測量物質(zhì)的特性比由一般光源誘導(dǎo)熒光所測的靈敏度提高2-10倍。


當(dāng)紫外光或波長較短的可見光照射到某些物質(zhì)時,這些物質(zhì)會發(fā)射出各種顏色和不同強(qiáng)度的可見光,而當(dāng)光源停止照射時,這種光線隨之消失。這種在激發(fā)光誘導(dǎo)下產(chǎn)生的光稱為熒光,能發(fā)出熒光的物質(zhì)稱為熒光物質(zhì)。


熒光分光光度計基本結(jié)構(gòu) 

01.樣品室:通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時,光源與檢測器成直角安排;測量固體時,光源與檢測器成銳角安排。

02.激發(fā)單色器:置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或第一單色器,篩選出特定的激發(fā)光譜。

03.發(fā)射單色器:置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器,常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

04.光源:為高壓汞蒸氣燈或氙弧燈,后者能發(fā)射出強(qiáng)度較大的連續(xù)光譜,且在300nm~400nm范圍內(nèi)強(qiáng)度幾乎相等,故較常用。 

05.檢測器:一般用光電管或光電倍增管作檢測器??蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D(zhuǎn)為電信號。


分子的吸收光譜和產(chǎn)生熒光的機(jī)制:

當(dāng)物質(zhì)分子吸收某些特征頻率的光子以后,可由基態(tài)躍遷至第一或第二電子激發(fā)態(tài)中各個不同振動能級和各個不同轉(zhuǎn)動能級。處于激發(fā)態(tài)的分子通過無輻射弛豫(例如,與其它分子碰撞過程中消耗能量,或者,對分子組織而言,誘發(fā)光化反應(yīng)而消耗能量等)降落至第一電子激發(fā)態(tài)的*低振動能級,然后再由這個*低振動能級以輻射弛豫的形式躍遷到基態(tài)中各個不同的振動能級,發(fā)出分子熒光。然后再無輻射弛豫至基態(tài)中*低振動能級。


幾乎所有物質(zhì)分子都有吸收光譜,但不是所有物質(zhì)都會發(fā)熒光。產(chǎn)生熒光必須具備以下條件: 

①吸收了與本身特征頻率相同的能量之后的物質(zhì)分子,必須具有高的熒光效率。許多吸光物質(zhì)并不產(chǎn)生熒光,主要是因?yàn)樗鼈儗⑺漳芰肯挠谂c溶劑分子或其它分子之間的相互碰撞中,還可能消耗于一次光化學(xué)反應(yīng)中,因而無法發(fā)射熒光,即熒光效率很低。

②該物質(zhì)分子必須具有與所照射的光線相同的頻率,這與分子的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。


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